Е. Дубинина, С.В. Ковругина, П.В. Коновалов

ты крови гемолизировали раствором трис-НС1 0,05 M (pH 7,4) в соотношении 1:10.

Состояние прооксидантной системы оценивали по уровню спонтанного и МКО белков плазмы крови с использованием метода Levine R.L. [16] в нашей модификации [2]. Метод оценки ОМБ основан на регистрации генерируемых в результате окисления карбонильных производных с помощью 2,4-динит-рофенилгидразина. Содержание образовавшихся 2,4-динитрофенилгидразонов определяли при длине волны (X) 270 нм и 363 нм.

О состоянии АОС судили по активности ферментов эритроцитов крови: ШД, глутатионредуктазы (ГР) и каталазы, а также по уровню восстановленного и окисленного глутатиона. Активность СОД определя­ли после специальной обработки гемолизированных эритроцитов смесью спирта с хлороформом и крис­таллическим КН₂РО₄ с целью осаждения гемоглоби­на (Hb) [12]. Полученную прозрачную надосадочную жидкость использовали для анализа активности СОД по методу, основанному на определении степени тор­можения реакции окисления кверцетина. Активность фермента выражали в условных единицах, отнесен­ных на 1 г Hb или на 1 мл эритроцитарной взвеси [7].

Об активности каталазы в гемолизате эритроцитов судили по убыли перекиси водорода за 1 мин при дли­не волны X=230 нм, выражали в международных еди­ницах (мМ перекиси водорода/мин х 10⁴) и относили к 1 мл эритроцитарной взвеси или 1 г Hb [10].

Активность ГР в плазме и эритроцитах определяли по степени окисления НАДФН при длине волны X=340 нм. Расчет активности фермента осуществляли с ис­пользованием миллимолярного коэффициента - 6,22 и выражали в интернациональных единицах на 1 мл ге-молизата/плазмы либо на 1 г Hb/белка плазмы [10].

Определение восстановленного и окисленного глутатиона в экстракте эритроцитов проводили по методу В. Чернышова [9]. Расчет уровня глутатиона осуществляли с использованием микромолярного ко­эффициента глутатиона - 0,88 и выражали в мкМ / на 1 г Hb.

Статистическую обработку полученных данных проводили на персональном компьютере с помощью пакета прикладных программ Statgraphics.

Обсуждение результатов

При анализе спонтанной ОМБ не выявлено досто­верных различий в плазме крови пожилых людей без психических нарушений и у больных с психическими нарушениями (табл. 1). Результаты наших исследо­ваний показали наличие статистически достоверных различий при изучении МКО белков плазмы крови во всех группах обследованных людей. Процесс старения сопровождается повышением МКО по сравнению с этим показателем для людей в возрасте 30-40 лет. У больных с сосудистой деменцией и АБ уровень карбо­нильных соединений ниже, чем у пожилых людей того же возраста без психических расстройств. Никаких раз­личий между показателями МКО белков крови у этих групп больных не было выявлено. Ранее было показана четкая корреляционная зависимость между степенью психических расстройств и уровнем карбонильных со­единений, образующихся в результате МКО белков плазмы крови больных с сосудистой деменцией [5].

Снижение уровня МКО белков плазмы крови больных с психическими нарушениями, по всей веро­ятности, отражают степень выраженности состояния ОС по сравнению с психически здоровыми пожилыми людьми. В результате длительного ОС в организме за

Та б л и ц а 1

Окислительная модификация белков плазмы крови у пожилых людей с психическими расстройствами

Спонтанная окислительная модификация белков      Металл-катализируемая окислительная модификация белков

Группы людей

1. Здоровые люди 30-40 лет, п=16

2. Пожилые люди без деменции, п=14

3. Пожилые люди с деменцией, п=26

4. Больные с АБ, п=16

^Р2-1 ^Р2-3 ^Р2-4

Здесь и в табл. 2, 3:

X=270 нм

X=363 нм

X=270 нм

X=363 нм

1 мл

1 мг белка

1 мл плазмы

1 мг белка     1 мл плазмы 1мгбелка 1 мл плаз­мы

1 мг белка

4,00±0,22     55,61 ±3,48     6,04±0,22     85,67±2,75     34,36±1,53*     475,90±22,90*    35,38±0,59* 489,20±10,20*

4,46±0,57     63,12±8,10     6,11±0,14     85,25±2,09     50,84±3,85*     707,40±50,66*    49,23±3,23* 685,25±41,79*

5,06±0,34     71,09±4,53     6,15±0,19    85,46±2,60     40,55±0,81*    556,49±12,15*    40,31±1,23* 560,06±14,91*

4,90±0,42    70,42± 5,39    6,19±0,27    87,53±3,22     41,53±0,99*    577,65±13,52*    40,94±1,78 580,66±18,95

<0,001 <0,01 <0,02

<0,001 <0,01

<0,02

<0,001 <0,01 <0,05

<0,001 <0,01 <0,05

звездочкой (*) отмечена статистическая достоверность (Р) исследуемых показателей.

плазмы

110

УСПЕХИ ГЕРОНТОЛОГИИ • 2007 • Т. 20, № 4

Та б л и ц а 2

Активность супероксиддисмутазы и каталазы эритроцитов крови у пациентов с психическими расстройствами

счет воздействия АФК и других радикальных продук­тов происходят необратимые структурные нарушения белков, приводящие к накоплению их агрегированных форм, неспособных участвовать в МКО за счет затруд­нения доступа короткоживущих радикальных продук­тов к аминокислотным остаткам.

Ранее нами было обнаружено интенсивное окис­ление тирозиновых остатков белков плазмы крови у обследованных людей [3]. Известно, что окисление тирозиновых остатков приводит к агрегации белков, ус­тойчивых к действию протеолитических ферментов. Из литературных данных известно, что при АБ происходит накопление окисленных нерастворимых агрегатов бел­ков в сенильных бляшках и нейрофибриллярных спле­тениях [17]. Структурно-измененные агрегаты белков могут быть одним из компонентов липофусцинов, ко­торые в виде гранул накапливаются с возрастом внутри клеток мозга [15]. Выявленные нами изменения интен­сивности МКО в плазме крови фактически отражают особенности окислительной деструкции белков мозго­вой ткани при состояниях сосудистой деменции и АБ.

Степень выраженности патологических процессов при старении организма зависит от способности организ­ма поддерживать сбалансированное соотношение меж­ду АОС и ПОС, своевременной мобилизации антиок-сидантной защиты (АОЗ) и сохранения оптимального соотношения между ферментативными и не фермента­тивными компонентами АОС. У пожилых психически здоровых людей нами обнаружено снижение активнос­ти СОД и каталазы эритроцитов, что является одним из подтверждений состояния ОС в процессе старения организма. У больных с сосудистой деменцией и АБ ак­тивность СОД возрастала по сравнению с контрольной группой пожилых людей. Все эти изменения со стороны

СОД происходили на фоне снижения активности ката-лазы эритроцитов крови при сосудистой деменции или сохранения ее активности у больных с АБ на уровне, характерном для пожилых людей без психических на­рушений. Это приводит к дисбалансу ферментативной активности в эритроцитах и накоплению перекиси водо­рода - конечного продукта СОД (табл. 2).

Обращает на себя внимание особенно высокая ак­тивность СОД эритроцитов при АБ, которая в 2 раза превышала активность фермента у психически здоро­вых пожилых людей, и статистически достоверно выше по сравнению с этим показателем для больных с сосу­дистой деменцией.

Выявленная нами высокая активность СОД эрит­роцитов и нарушение соотношения между СОД и ка-талазой при АБ созвучны с изменениями в мозговой ткани. Имеются литературные данные о том, что ги­гантские пирамидные нейроны, которые потенциально обладают высокой чувствительностью к нейродегене-ративным процессам при АБ, содержат высокий уро­вень белка СОД [11]

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80