ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЕ И АНТИОКСИДАНТНЫЕ СВОЙСТВА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ МОРСКИХ ГИДРОБИОНТОВ И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В ГЕРИАТРИЧЕСКОЙ

ПРАКТИКЕ

На правах рукописи

Шутикова Анна Леонидовна

14.00.36 - Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Владивосток - 2009

Работа выполнена в Государственном учреждении научно-исследовательском ин­ституте эпидемиологии и микробиологии Сибирского отделения Российской ака­демии медицинских наук

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Запорожец Татьяна Станиславовна Научный консультант:

доктор биологических наук Пивненко Татьяна Николаевна Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Авдеева Жанна Ильдаровна доктор медицинских наук Селькова Евгения Петровна

Ведущее учреждение:

Государственное учреждение Санкт-Петербургский институт биорегуляции и ге­ронтологии северо-западного отделения Российской академии медицинских наук

Защита диссертации состоится  «_»_2009 г. в_часов на

заседании Диссертационного совета Д 208.046.02 при Федеральном государст­венном учреждении науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н. Габричевского» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, по адре­су: 125212, г.Москва, ул. Адмирала Макарова, 10

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государствен­ного учреждения науки «Московский научно-исследовательский институт эпиде­миологии и микробиологии им.Г.Н. Габричевского» Федеральной службы по над­зору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, по адресу: 125212, г.Москва, ул. Адмирала Макарова, 10

Автореферат разослан «_»_2009 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета Д 208.046.02

кандидат медицинских наук Л.И. Новикова

2

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Старение населения - объективный общемировой процесс, обусловленный сложным комплексом факторов, включающих особенности воспроизводства на­селения, интенсивность и направленность миграции, санитарно-демографические последствия войн и др. Доля пожилых, старых и очень старых людей в общей популяции населения неуклонно увеличивается (Шабалин В.Н., 2001). Темп при­роста лиц пожилого возраста значительно опережает темп прироста всего насе­ления. В России формирование существенной прослойки пожилых людей, прежде всего, связано со снижением рождаемости и сокращением доли детей в общей численности населения, а также с высокой смертностью людей трудоспособного возраста. Увеличению численности пожилых людей также способствуют внедре­ние достижений медико-биологических исследований, эффективное лечение он­кологических заболеваний, более действенная, чем ранее профилактика инфаркта и инсульта. За период с 1959 г по 2000 г численность лиц старше 60 лет в России увеличилась более чем в два раза и составила в 2000 году 30,18 млн. человек (18,5%), из них лица старше 65 лет - 67,6%, старше 75 лет - 22,3%, старше 80 лет - 10,9%, старше 100 лет - 0,05% (Шабалин В.Н., 2001). По прогнозам Государст­венного комитета Российской Федерации по статистике, население страны к 2016 году сократится по сравнению с началом 2001 года на 10,4 млн. человек, а чис­ленность лиц пожилого возраста возрастет и почти в два раза превысит числен­ность детей.

В то же время физиологическое старение, не сопровождаемое развитием каких-либо хронических заболеваний, определяется лишь у 3-6% людей пожилого и старческого возраста. Снижение резервных, адаптационных возможностей ор­ганизма пожилых людей, обусловленные постепенно нарастающими сдвигами в структуре и функции клеток, органов и систем, создают условия для возникнове­ния множества различных болезней.

Значительную роль в процессе старения играют иммунологические меха­низмы и свободнорадикальное окисление. Для пожилого и старческого возраста характерно снижение противомикробного иммунитета, противовирусной и про­тивоопухолевой защиты (Mysliwska J., 2000; Solana R., 2000), Т-клеточного звена иммунитета (Кишов М.Г. с соавт., 1996; Ярилин, А.А., 2003; Effros R.B et al., 1994 , Haynes L. et al., 1999), гуморального иммунного ответа как на аутологич-ные, так и на экзогенные антигены (Макинодан Т.,1980), изменение рецепторного аппарата иммунокомпетентных клеток и соотношения клеточных субпопуляций (Хаитов Р.М., 1995; Effros R.B et al., 1994; Herndon F.J., 1997; Chen J.J., 2000; Schindowski К., 2002). Одной из основных причин ослабления пролиферации и дифференцировки Т-лимфоцитов является снижение секреции IL-2 (Rea I.M. et al, 1996; J. Mysliwska et al., 2000).

Накопление повреждений в клетках и скорость старения зависят также от соотношения процессов образования активных форм кислорода и их обезврежи­вания ферментативной системой антиоксидантной защиты (Гусев В.А., 2000). По­вреждение макромолекул АФК приводит к мутациям, нестабильности генома в целом и развитию ряда возрастных патологий, таких как онкологические и сер­

3

дечно-сосудистые заболевания, возрастная иммунодепрессия, дисфункция мозга, развитие катаракта и многие др. (Пескин А.В, 1997; Гусев В.А., 2000; Ланкин В.З.,

2001).

В этой связи применение иммунокорректоров и антиоксидантов является одной из наиболее актуальных и в то же время наиболее дискутабельных проблем современной геронтологии. Использование таких препаратов может способство­вать разрыву патологической цепи в структуре старение - болезнь, что, в свою очередь, позволит уменьшить предпосылки к развитию патологии в старости и тем самым уменьшить вероятность развития заболеваний. Включение иммуно-корректоров и антиоксидантов в базисную терапию при различных заболеваниях у лиц старших возрастных групп способствует расширению адаптационных воз­можностей организма и профилактике преждевременного старения, обусловлен­ного влиянием болезней старости (Чеботарев Д.Ф., 2001).

В настоящее время наиболее предпочтительным представляется примене­ние у лиц пожилого возраста препаратов, в том числе БАД, природного происхо­ждения, оказывающих мягкое иммуномодулирующее и антиоксидантное действие и имеющих минимум побочных эффектов.

К числу таких препаратов относятся БАД «ДНКаС» и «Моллюскам», раз­работанные в ФГУП «ТИНРО-центр». Исследованию антиоксидантного и имму-номодулирующего действия этих БАД у пожилых людей и посвящена настоящая работа.

Цель работы:

Экспериментальное и клинико-иммунологическое обоснование применения БАВ из морских гидробионтов н-ДНК и моллюскама для коррекции иммунных нарушений, свободнорадикальных процессов и профилактики заболеваний орга­нов дыхания у людей пожилого возраста.

Задачи исследования:

1. Исследовать антиоксидантные свойства н-ДНК и моллюскама и их воздейст­вие на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови здоро­вых доноров в экспериментах in vitro.

2. Изучить морфофункциональную структуру эпителия слизистой оболочки тра­хеи крыс при прямом холодовом воздействии и на фоне введения н-ДНК и моллюскама.

3. Исследовать действие БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» на популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов (CD3+-, CD4+-, CD8+-, CD20+-, CD16+-лимфоциты) периферической крови пожилых людей.

4. Изучить влияние БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» на уровень иммуноглобули­нов (IgG, IgM, IgA) в сыворотке крови, на фагоцитарную активность и кисло-родзависимую цитотоксичность нейтрофилов периферической крови у пожи­лых людей.

5. Исследовать влияние БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» на показатели перекис-ного окисления липидов и антиоксидантной защиты у пожилых людей.

Научная новизна.

Экспериментально доказано, что моллюскам обладает антиоксидантным действием, которое проявляется в прямых реакциях нейтрализации свободных ра­

4

дикалов и в опосредованных реакциях накопления вторичных продуктов пере-кисного окисления липидов in vitro.

Экспериментально обоснована возможность применения БАД «Моллю­скам» для профилактики и в комплексном лечении заболеваний органов дыхания. Доказано, что моллюскам защищает слизистую оболочку трахеи эксперимен­тальных животных при общем охлаждении.

В результате комплексной оценки состояния факторов врожденного и адап­тивного иммунитета у пожилых людей показана эффективность применения БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» для коррекции иммунных нарушений. Установлена на­правленность действия БАД, зависящая от исходных значений показателей.

Установлено, что БАД «Моллюскам» оказывает антиоксидантное действие, снижая в эритроцитах уровень МДА и повышая АОА плазмы крови у пожилых людей, смещая баланс между процессами перекисного окисления липидов и меха­низмами антиоксидантной защиты клетки в сторону последней.

Установлено, что БАД «ДНКаС» оказывает регулирующее действие на процессы липопероксидации у пожилых людей, восстанавливая баланс между процессами перекисного окисления липидов и механизмами антиоксидантной за­щиты клетки.

Практическая значимость.

Обоснована целесообразность применения биологически активных добавок к пище «ДНКаС» и «Моллюскам», обладающих иммуномодулирующим действи­ем, для коррекции возрастных иммунных нарушений.

Установлена эффективность применения «Моллюскама» в качестве БАД, обладающей антиоксидантным действием. Рекомендовано ее применение при ги­перактивации системы перекисного окисления липидов у пожилых людей.

Установлена эффективность «ДНКаС» в качестве БАД, оказывающей регу­лирующее действие на процессы липопероксидации. Рекомендовано ее примене­ние для коррекции свободнорадикальных процессов у пожилых людей.

Внедрение результатов работы.

Подготовлены и утверждены Департаментом здравоохранения админист­рации Приморского края методические рекомендации «Использование биологи­чески активных добавок к пище «ДНКаС» и «Моллюскам» для коррекции нару­шений иммунной и антиоксидантной систем у пожилых людей» (г. Владивосток, 2007) (Авторы: Шутикова А.Л., Запорожец Т.С. и др.).

БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» используются в отделении Седанкинского дома-интерната для ветеранов для профилактики и коррекции расстройств им­мунной и оксидантной систем (акт внедрения от 07.11.2008 г).

Полученные новые данные по применению в геронтологической практике биологически активных веществ из морских гидробионтов используются при обучении студентов медицинских ВУЗов и факультетов, а также на курсах ФПК (акт внедрения от 10.11.2008 г).

Отчеты об экспериментальном исследовании моллюскама и БАД на его основе были включены в пакет документов для регистрации в Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека,

5

по результатам экспертизы получено свидетельство № 77.99.11.3.У.4071.10.04 от 08.10.04 г.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Моллюскам обладает прямым антиоксидантным действием.

2. Моллюскам защищает слизистую оболочку трахеи экспериментальных жи­вотных при общем охлаждении.

3. БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» оказывают модулирующее действие на фак­торы врожденного и адаптивного иммунитета у пожилых людей, зависящее от исходного уровня показателей.

4. БАД «Моллюскам» оказывает антиоксидантное действие на систему ПОЛ-АОЗ у пожилых людей, смещая баланс между процессами перекисного окис­ления липидов и механизмами антиоксидантной защиты клетки в сторону по­следней. БАД «ДНКаС» оказывает регулирующее действие на процессы ли-попероксидации.

Апробация результатов диссертационной работы:

Диссертация апробирована на заседании Ученого Совета ГУ НИИЭМ СО РАМН (протокол №5 от16.05.2007г.).

Материалы диссертации представлены на II Дальневосточном региональ­ном конгрессе «Человек и лекарство» с международным участием (Владивосток, 2005), Итоговой научно-практической конференции с международным участием: «Вопросы сохранения и развития здоровья населения Севера и Сибири» (Красно­ярск, 2005), I Международной научно-технической конференции молодых уче­ных: «Актуальные проблемы технологии живых систем» (Владивосток, 2005), II региональной научной конференции «Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии» (Владивосток, 2006), V Всемирном кон­грессе по иммунопатологии и аллергии (Москва, 2007), V Европейском конгрессе по астме (Москва, 2007).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 9 работ. Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 148 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы «материалы и методы исследования», 3 глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, указателя ли­тературы, включающего 294 источника, из них 91 отечественный и 203 ино­странных. Работа иллюстрирована 20 таблицами и 14 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ Материалы и методы исследования

Экспериментальные и клинические исследования проведены в лаборатории иммунологии ГУ НИИЭМ СО РАМН, а также совместно с сотрудниками Седан-кинского дома-интерната для ветеранов (г. Владивосток). Отдельные разделы ра­боты выполнены совместно с лабораторией прикладной биохимии ФГУП «ТИНРО-центр» и кафедрой гистологии, цитологии и клеточной биологии ГУ ВПО «Амурская государственная медицинская академия Росздрава». Все экспе­

6

риментальные и клинические исследования проведены с разрешения Комитета по биомедицинской этике ГУ НИИЭМ СО РАМН (протокол № 3/2 от 14.07.2004 г.).

1. Исследуемые препараты

Низкомолекулярная ДНК (н-ДНК) - выделена из молок лососевых рыб в ФГУП «ТИНРО-центр» (патент РФ № 2122856 от 10.12.98). Химический состав: массовая доля ДНК - 79,02%, содержание белка - 7,8%, липидов - 2,1%, воды -10,68%, нуклеиновых кислот - 70-80%, м.м. 270-500 кДа. Метод выделения - соле­вая экстракция с последующим осаждением конечного вещества из раствора эти­ловым спиртом и удалением жира и влаги сушкой на воздухе при комнатной тем­пературе.

На основе н-ДНК разработана БАД «ДНКаС» (н-ДНК+ витамин С) (реги­страционное удостоверение МЗ РФ №004978.Р.643.10.2002 от 30.10.2002, свиде­тельство Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека № 77.99.23.3.У.8747.10.08 от 13.10.2008).

Моллюскам - комплекс свободных аминокислот, низкомолекулярных бел­ков и пептидов, выделенный в ФГУП «ТИНРО-центр» методом ферментативного гидролиза из двустворчатых и головоногих моллюсков (патент РФ № 2171066 от 22.03.2000). Химический состав: свободные аминокислоты (таурин, аспарагино-вая кислота, треонин, глутаминовая кислота, пролин, глицин, аланин, цистеин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, тирозин, фенилаланин, в-аланин, орнитин, лизин, гистидин, аргинин) - 56-71%, липиды - менее 1%, белки - 19-25%, углево­ды - менее 1%, минеральные вещества - 7,9-8,5 %, гистидинсодержащие дипеп-

тиды - 2-14,3 %.

На основе моллюскама разработана БАД «Моллюскам», зарегистрирована в Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благопо­лучия человека (свидетельство № 77.99.11.3.У.4071.10.04 от 08.10.2004).

2. Лабораторные животные

Экспериментальные исследования выполнены на 80 крысах массой 200 г., находившихся на стандартной диете в боксированных помещениях с соблюдени­ем всех правил и международных рекомендаций Европейской конвенции по за­щите позвоночных животных, используемых в экспериментальных работах (1986). Разброс животных в группе по массе тела не превышал ±10%. Контрольные и опытные группы составили животные одного пола (самцы) и возраста (6 месяцев).

3. Клинический материал

В соответствии с протоколом исследования (протокол № 3/2 от 14.07.2004 г.) клинические и лабораторные данные были проанализированы у 57 пожилых людей Седанкинского дома-интерната для ветеранов - 42 женщины и 15 мужчин в возрасте от 67 до 93 лет.

Исследование было рандомизированным, обеспечивающим случайное рас­пределение пожилых людей в 2 группы (для оценки эффективности применения БАД «ДНКаС» и «Моллюскам»).

1 группа - 30 пожилых людей (20 женщин и 10 мужчин в возрасте от 67 до 87 лет, их средний возраст составил 77±10 лет), которые получали БАД «ДНКаС» по 2 таблетки, содержащие по 50 мг ДНК, 1 раз в день в течение 30 дней.

7

2 группа - 27 пожилых людей (22 женщины и 5 мужчин в возрасте от 69 до 93 лет, их средний возраст составил 81±12 лет), которые получали БАД «Моллю­скам» по 1 капсуле, содержащей 250 мг моллюскама, 1 раз в день в течение 15 дней.

Для исследования иммунного статуса и показателей системы ПОЛ-АОЗ ис­пользовали венозную кровь. Забор крови проводили в равных условиях (утром, натощак, в количестве 12-15 мл).

Исследование иммунного статуса и показателей системы ПОЛ-АОЗ прово­дили дважды - до и после окончания приема БАД.

4. Микроорганизмы

Staphylococcus aureus (штамм 209) (музей культур микроорганизмов ГУ НИИЭМ СО РАМН) выращивали при температуре 37°С в течение 18-24 часов на мясопептонном агаре (ph 7,2), после чего культуру микроорганизмов смывали 0,85% раствором NaCl и готовили взвесь микробов нужной концентрации по оп­тическому стандарту мутности.

Все направления, методы и объем проведенных исследований представле­ны в табл. 1.

Таблица 1

Направления, методы и объем исследований_

8

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ I. Исследование антиоксидантной активности моллюскама и н-ДНК с использованием прямых и непрямых методов в экспериментах in vitro

В результате проведенных исследований было установлено, что моллюскам обладает прямым антиоксидантным действием в реакциях нейтрализации актив­ных форм кислорода и свободных радикалов.

9

1.1. Регистрация хлораминового комплекса, появляющегося при добавле­нии моллюскама к раствору гипохлорита натрия (NaClO)

Моллюскам в концентрации 0,2 мг/мл связывал гипохлорит натрия в кон­центрации 5 мМ в течение 15 мин, образуя стабильное соединение (т.н. хлорами-новый комплекс). При этом оптическая плотность, регистрируемая при X = 265­270 нм, характерная для гипохлорита натрия изменялась: регистрировался пик с максимумом поглощения при Х=255нм, свидетельствующий об образовании хло­раминового комплекса (рис. 1). Образование хлораминового комплекса свиде­тельствует об инактивации гипохлорит аниона в реакционной смеси, демонстри­руя способность моллюскама связывать активные формы кислорода.

Спектры поглощения образцов

0,7 т

240      245      250      255      260      265      270      275      280      285 290

длина волны

- -Моллюскам -Гипохлорит - - - гипохлорит + моллюскам

Рис.1. Спектры поглощения гипохлорита натрия и комплекса гипохлорит-моллюскам.

Для н-ДНК таких исследований не проводили, т.к образование хлорамино-вых комплексов характерно только для некоторых аминокислот и пептидов.

1.2. Ингибирование образования свободных радикалов моллюскамом и н-ДНК методом обесцвечивания АВТБ (2,2 азинобис-3-этил-бензотиадолин-6-сульфоновой кислоты)

Моллюскам ингибировал свободнорадикальный катион АВТ8*+, изменяя величину оптической плотности реакционной смеси. Величину антиоксидантной активности выражали в виде тролоксового эквивалента антиоксидантной емкости ТЕАС (trolox equivalent antioxidant capacity) (тролокс - синтетический аналог природного антиоксиданта токоферола). При этом моллюскам в количестве 1000 мг обеспечивал антиоксидантную активность, эквивалентную 45 мг тролокса. Величины ТЕАС для различных готовых форм БАД «Моллюскам» (таблетки, капсулы) коррелировали с содержанием вещества моллюскам в этих формах (табл.2). В таблетированной форме БАД «Моллюскам» в антиоксидантную ак­тивность также вносит свой вклад аскорбиновая кислота.

Н-ДНК прямым антиоксидантным действием, обеспечивающим инактива­цию радикала АВТ8*+, практически не обладала. Проявление слабой антиокси-дантной активности в случае БАД «ДНКаС», наиболее вероятно, является резуль­татом действия, входящей в ее состав аскорбиновой кислоты (табл.2).

10

Таблица 2

Антиоксидантная активность моллюскама и н-ДНК_

Умеренное антиоксидантное действие моллюскама позволяет использовать его в достаточно больших дозировках, необходимых для обеспечения включения в метаболизм различных тканей и органов. Умеренность антиоксидантного дей­ствия предпочтительна с точки зрения предотвращения дальнейшего окисления биологических субстратов, имеющего место при использовании мощных антиок-сидантов, которые в высоких концентрациях становятся прооксидантами.

1.3 Определение накопления малонового диальдегида (вторичный продукт перекисного окисления липидов) в модельной системе in vitro

Этот метод позволяет оценить антиоксидантные свойства веществ в усло­виях, наиболее приближенных к живому организму.

В результате проведенных исследований установлено статистически зна­чимое снижение уровня МДА в сыворотке крови после добавления моллюскама, БАД «Моллюскам». Низкомолекулярная ДНК влияния на уровень МДА в систе­ме in vitro не оказывала (табл.3).

Таблица 3

Антиоксидантный эффект моллюскама и н-ДНК

Примечание: p - значимость различий при сравнении с контролем; использован параметриче­ский t-критерий Стьюдента для двух попарно несвязанных между собой вариационных рядов.

Таким образом, защитный эффект моллюскама проявляется в том, что он препятствует накоплению в сыворотке крови МДА - вторичного продукта пере-кисного окисления липидов.

11

II. Действие биологически активных веществ н-ДНК и моллюскама на функциональную активность нейтрофилов

Фагоцитарную активность нейтрофилов исследовали в модельной системе in vitro, позволяющей оценить прямое действие веществ на фагоцитирующие клетки (нейтрофилы крови здоровых доноров инкубировали с исследуемыми БАВ

в течение 60 минут при 37°C в конечной концентрации - 1 мкг/мл, 10 мкг/мл, 100 мкг/мл с последующим внесением в клеточную суспензию S. ашвш и дальней­шей инкубацией в течении 30 и 120 минут).

Инкубирование нейтрофилов крови здоровых доноров с н-ДНК и моллю-скамом в течение 30 минут приводило к увеличению количества клеток, участ­вующих в фагоцитозе, и усилению их способности поглощать S. ашвш по срав­нению с контролем (нейтрофилы крови здоровых доноров, инкубированные с S. атвт).

Через 120 минут в контроле изменения фагоцитарной активности нейтро-филов не обнаружено (по сравнению с показателями, зарегистрированными через 30 минут инкубации). Динамика изменений показателей фагоцитарной активно­сти нейтрофилов, инкубированных с исследуемыми БАВ представлена на рис. 2,3.

%

100 98 96 94 92 90 88 86 84 82 80 78

30' 120' контроль

30' 120' 1 мкг/мл

30' 120' 10 мкг/мл

14 12 10 8 6 4 2 0

30' 120' 100 мкг/мл

усл. ед.

1ФП ■ФЧ

Рис.2. Влияние БАВ н-ДНК на функциональную активность нейтрофилов крови здоровых доноров.

100 98 96 94 92 90

88 86 84 82 80

78 76 74 72 70

30' 120'

контроль

30' 120' 1 мкг/мл

30' 120' 10 мкг/мл

14 12 10 8 6 4 2 0

усл.ед.

30' 120' 100 мкг/мл 1ФП •ФЧ

Рис.3. Влияние БАВ моллюскам на функциональную активность нейтрофилов крови здоровых доноров.

12

Инкубирование нейтрофилов с н-ДНК в концентрации 1 мкг/мл способст­вует усилению поглощения микроорганизмов (ФЧ₃₀ 10,75±0,63 и ФЧ₁₂₀ 11,77±0,66; р=0,004); при инкубировании нейтрофилов с н-ДНК в концентрации 10 мкг/мл и 100 мкг/мл значения ФЧ снижаются, что может расцениваться как усиление процессов переваривания микроорганизмов (ФЧ₃₀ 11,43±1,22 и ФЧ₁₂₀ 9,36±1,29; р=0,001 и ФЧ₃₀₁₂₀ 8,04±0,58; р=0,027 соответственно); при инкубации нейтрофилов с моллюскамом в концентрации 1 мкг/мл и 10 мкг/мл наблюдалась аналогичная динамика изменений показателей фагоцитоза (ФЧ30 12,19±0,68 и ФЧ₁₂₀ 10,08±0,41; р=0,020 и ФЧ₃₀ 10,69±0,10 и ФЧ₁₂₀ 7,13±0,10; р=0,003 соответственно). 10,84±0,42 и ФЧ

Таким образом, н-ДНК в конечной концентрации 1мкг/мл, 10мкг/мл, 100мкг/мл и моллюскам в конечной концентрации 1мкг/мл, 10мкг/мл увеличива­ют количество клеток, участвующих в фагоцитозе, и усиливают их способность поглощать и переваривать S. aureus.

III. Влияние моллюскама и н-ДНК на мукоциллиарную систему возду­хоносного отдела легких, показатели перекисного окисления липидов и ан­тиоксидантной системы при общем охлаждении

Выполнение данного фрагмента работы обосновано тем, что в структуре за­болеваемости людей пожилого возраста значительный удельный вес занимают хронические неспецифические заболевания легких и пневмонии (Коркушко О.В., 1993; Чеботарев Д.Ф., 1997; Фещенко Ю.И., 2002). Заболевания бронхов и легких у пожилых людей характеризуются склонностью к раннему возникновению функциональной недостаточности дыхательной системы в результате истощения физиологических механизмов защиты, что определяет необходимость особых подходов к профилактике и лечению заболеваний органов дыхания у пожилых людей

Экспериментальная часть работы по исследованию изменений, возникаю­щих в эпителии слизистой оболочки трахеи и в системе ПОЛ-АОЗ при длитель­ном холодовом воздействии выполнена на крысах (самцах) массой 200 г., кото­рых разделили на группы:

• контрольная группа (К) - интактные животные, которые содержались в стан­дартных условиях вивария при температуре +18 - +20°С.
• контрольная группа холод (Х) - животные, подвергнутые холодовому воздей­ствию, охлаждались в течение 28 дней по 3 часа ежедневно при температуре -15 °С.
• опытные группы (ХМ) и (ХД) - животные, которые ежедневно в течение 14 дней получали перорально моллюскам (ХМ) и н-ДНК (ХД) в дозе 10 мг/кг, после чего охлаждались в течение 28 дней по 3 часа ежедневно при температу­ре -15 °С на фоне введения БАВ (за 30 минут до охлаждения).

В эксперименте изучали морфологическую структуру эпителия слизистой оболочки трахеи крыс. При действии холода слизистая оболочка трахеи подверга­лась значительной перестройке: снижался регенерационный потенциал эпителия за счет уменьшения промежуточных и базальных клеток, увеличивалось содер­жание бокаловидных и мигрирующих тучных клеток, приводящее к гиперсекре­

13

ции слизи (табл.4), нарушалось регулярное расположение ресничек. Вследствие этих процессов нарушался мукоциллиарный транспорт (рис.4 Б, В).

Пероральное введение крысам моллюскама оказывало выраженное защит­ное действие на эпителий слизистой оболочки трахеи экспериментальных живот­ных, предупреждая изменения, характерные для холодового воздействия (нару­шение регулярности расположения ресничек, исчезновение поперечных волн движения ресничек, гиперсекрецию слизи). Реснитчатый покров сохранял харак­терный волнообразный рельеф (рис.4 Г).

В Г

Рис.4. Поверхность слизистой оболочки трахеи крыс (сканирующая электронная микроскопия)

А - интактные крысы (увеличение х 2000). На боковой поверхности трахеи обнаружива­ются островки, состоящие из 5 - 15 бокаловидных клеток

Б, В - крысы, подвергнутые охлаждению (увеличение х 3500). Нарушение мукоцил-лиарного транспорта в результате скопление слизи на поверхности ресничек (В) и их «склеи­вания» (Б).

Г - крысы, подвергнутые охлаждению на фоне введения моллюскама (увеличение х 5000) Сохраняется нормальный рельеф реснитчатого покрова слизистой оболочки. Между ресничками выделяются апикальные полюса бокаловидных клеток с большим количеством микроворсинок.

14

Слизистая оболочка животных, получавших моллюскам, как по морфоло­гическому строению, так и по клеточному составу фактически не отличалась от таковой интактных крыс (табл.4.).

Таблица 4

Сравнительная характеристика морфометрических показателей слизистой обо­лочки трахеи экспериментальных животных_

Структура слизистой оболоч­ки трахеи	Едини­цы из­мерений	Вид эксперимента
		К n=20 M±m	Х n=20 M±m	ХМ n=20 M±m
Клетки покровного эпителия	%	%	%	%
1. реснитчатые	%	52,3±4,3	52,59±4,4 /7=0,963	52,4±4,3 р=0,636
2. бокаловидные	%	11,53±1,1	14,66±1,3 р=0,074	10,78±1,2 р=0,648
3. промежуточные	%	10,57±0,9	4,41±0,42 р=0,000	11,1±0,92 р=0,683
4. базальные	%	21,3±1,8	15,52±1,3 р=0,013	21,8±1,9 р=0,850
5. щетинчатые	%	Информация для пациентов Аллергология Гастроэнтерология Гематология Гинекология Дерматология Кардиология ЛОР болезни Маммология Неврология Нейрохирургия Нефрология Онкология Ортопедия Офтальмология Педиатрия Проктология Психотерапия Пульмонология Ревматология Семейная медицина Терапия Урология Физиотерапия Хирургия Эндокринология Геронтология Геронтология - справочник Наркология Фтизиатрия Гастроэнтерология Гематология Гомеопатия Гомеопатия Гомеопатия в период беременности Санитарная авиация Санитарная авиация Лечение за рубежом Лечение в США Лечение в Сингапуре Лечение в Корее Лечение в Чехии Показать зарубежные переводы и статьи О проекте Карта сайта Архив статей Московский Врач 107241, г. Москва, Щелковское ш. д 23а телефон (495) 741-06-41 Лечение в Израиле