Медицина Казахстана
Это означает, что содержание R-энантиомера должно тщательно контролироваться в основной массе субстанции клопидогреля и в лекарственных продуктах, как того требуют органы здравоохранения. Следует заметить, что в настоящее время нет какой-либо официальной фармакопейной статьи, которая бы регламентировала пределы примесей и содержание образцов клопидогреля в массе. В соответствии с руководством ICH (ICH Q3B) под заголовком «примеси в новых лекарственных продуктах», уровень содержания примесей в лекарственном препарате так же подлежит тщательному контролю, и должно быть определено максимальное содержание примесей, подтвержденное адекватными данными в документах для регистрации нового лекарственного препарата [6].
В литературе сообщалось несколько методов определения клопидогреля. Был валидирован метод проведения количественного определения. Для проведения растворения использовался лопастной метод. Большинство копий не выдерживали сравнения с оригинальным препаратом: количество примесей у них было выше, содержание клопидогреля ниже, различались профили по растворению, и после 3 месяцев хранения в экстремальных условиях в оригинальной упаковке результаты анализа генериков и оригинального препарата в большинстве случаев значительно различались.
нестереоспецифичной жидкостной хроматографии (LC) для определения клопидогреля в лекарственных формах для приема внутрь, и он использовался для исследования деградации в экстремальных условиях [7]. Исследовалась хиральная инверсия клопидогреля in vivo с использованием хиральной методики жидкостной хроматографии (HPLC) в то время как нестереоспеци-фичный метод количественного определения применялся для мониторинга гидролиза клопидогреля [8]. Также для оценки клопидогреля применялся метод капиллярного электрофореза с использованием циклодекстринов [9].
Другой важной частью контроля качества является высвобождение активной формы фармацевтической составляющей, в данном случае, таблетки. В большинстве случаев тест на растворение in vitro с использованием лопастей проводится, чтобы проверить, растворяется ли минимальное количество за определенное время. Однако профили растворения с одинаковым растворенным процентным количеством за определенное время, могут иметь различный вид, перед тем как достигнут этого времени, которое, с фармакокинетической точки зрения, может привести к разнице в концентрациях в плазме. Также для сравнения является целесообразным проверить множественные временные точки.
В данной статье описывается качество 18 копий и проводится сравнение с качеством оригинального лекарственного продукта (PLAVIX®/ISCOVER®). Оценивались однородность массы, чистота и содержание с использованием метода хирального разделения с помощью жидкостной хроматографии, и профили растворения. Образцы анализировались в разные точки времени: первая в точке времени ноль и затем после 3 месяцев хранения в оригинальной упаковке при 400С и относительной влажности 75% для определения влияния этих экстремальных условий на профиль примесей.
2. Экспериментальная часть
2.1. Реактивы и образцы
Ацетонитрил для хроматографии был получен от Biosolve LTD (Valkenswaard, Нидерланды), метанол от Fischer Chemicals (Loughborough, Великобритания), соляная кислота и калия дигидрофосфат аналитической реа-гентной чистоты от Riedel de Haen (Seelze, Германия) и калий хлорид для анализа от Chem-Lab (Lichtervelde, Бельгия). Мембранные фильтры 0,45 мкм (GHP Acrodisc
Журнал НИИ кардиологии и внутренних болезней МЗ РК
397
GF 25 мм шприцевой фильтр) были получены от Gelman Laboratory (Ann Arbor, MI, США). Деминерализованная вода дистиллировалась на аппарате из стекла.
Помимо трех различных серий контроля, все 18 копий получены из пяти стран. Коммерческие названия, производители и страна происхождения каждого продукта (выраженное в виде клопи-догреля основания) приведены в Табл. 1. Контрольные субстанции клопидогреля, R-энантиомер и продукт гидролиза (Рис. 1) были любезно предоставлены Sanofi-Synthelabo (Париж, Франция).
2.2. Приборы
Хроматографические анализы проводились с использованием насоса L-7100, авто-самплера L-7200 и детектора UV-Vis L-7400 от Merck-Hitachi (Darmstadt, Германия). Данные собирались и интегрировались на компьютере (Сompaq, Houston, ТХ, США) при помощи интерфейса D-7000 (Merck-Hitachi).
Колонка ULTRON ES-OVM, 5 мкм (внутренний диаметр
4,6 мм х 150 мм) (Shinwa Chemical Industries, Kyoto, Japan) погружалась в водяную баню с охлаждающим устройством F-10 от Julabo (Seelbach, Германия).
Тест на растворение проводился с использованием лопастного аппарата 72R (Hanson Research Coroporation, Nortridge, CA, США). Через определенные промежутки времени изымалась проба и делалось количественное определение активного вещества при помощи спектрофотометра Lambda EZ 201 UV-Vis (Perkin-Elmer, Norwalk, CT, USA) при длине волны 240 нм в кювете 1,0 см относительно среды растворения (раствор сравнения).
2.3. Однородность массы
Двадцать таблеток каждой серии взвешивали индивидуально и рассчитывали среднюю массу. В Европейской Фармакопее (Eur. Ph.) указано, что не более чем две таблетки могут иметь отклонение от средней массы более чем на 7,5% для таблеток от 80 до 250 мг и 5% для таблеток с массой выше 250 мг. Ни одна таблетка не должна иметь отклонение, более чем вдвое превышающее указанные значения [10].
2.4. Хроматография
Использовался метод хиральной жидкостной хроматографии для выявления примесей и количественное определение энантиоспецифических изомеров. В качестве стационарной фазы использовалась колонка ULTRON ES-OVM, 5 мкм (внутренний диаметр 4,6 мм х 150 мм). Подвижная фаза состояла из смеси ацетонитрил - 0,01 М раствор калия дигидрофосфата (объемное соотношение 25:75). Скорость потока была 1 мл/мин, температура колонки 170°С, объем инжекции 10 мкл и детектирование в ультрафиолетовой области проводилось при 220 нм. Растворы образцов для хроматографирования готови
Табл. 1. Обзор образцов, использованных в этом исследовании и результаты содержания
Образец |
Продукт |
Фармацевтическая компания (страна происхождения) |
Среднее значение (% от указан. на упаковке81) |
Контрольн. серия 1 |
ПЛАВИКС |
Sanofi-Synthelabo (France) |
97.2 |
Контрольн. серия 2 |
ПЛАВИКС |
Sanofi-Synthelabo (France) |
99.3 |
Контрольн. серия 3 |
ПЛАВИКС |
Sanofi-Synthelabo (France) |
97.3 |
1 |
Плагрил 75® |
Dr. Reddy‘s Laboratories Ltd. (India) |
95 |