Суточную агаровую культуру индикаторно­го штамма микроорганизмов, бактериофаги к которому необходимо выявить, суспендировали в изотоническом растворе натрия хлорида в концентрации 10⁹ кл./мл по оптическому стан­дарту мутности и засевали сплошным газоном на питательный агар. Засеянные чашки подсу­шивали в течение 30 мин при 37 С.

По поверхности подсушенной питательной среды раскладывали стерильные квадраты, вы­резанные из ядерных фильтров. На одну чашку можно поместить до 8 фильтров. На поверх­ность каждого квадрата-фильтра наносили по 10 - 30 мкл (1 капля) фагосодержащего матери­ала. Через 10 - 20 мин, после просачивания большей части капли через фильтр, мембрану удаляли с помощью пинцета. Чашки инкубиро­вали в течение суток. О наличии искомого бак­териофага судили по появлению в месте нахож­дения фильтра стерильного пятна.

134

№ 1а 2001

Краткие сведения

Посев индикаторной культуры можно осу­ществлять и после нанесения фагосодержащего материала. Однако в этом случае «пятна» бак­териофага получаются более «размытыми».

Ядерные фильтры могут быть использова­ны повторно. В этом случае снятые с чашки фильтры дезинфицируют кипячением, промы­вают водопроводной водой, высушивают и сте­рилизуют, как было описано выше.

Указанная методика была с успехом апроби­рована нами при выделении стафилококковых бактериофагов из лизогенных штаммов после индукции ультрафиолетовым облучением, а так­же при исследовании питьевой воды на бактери­офаги кишечных палочек. Она обеспечивает воз­можность проведения массовых исследований при минимальных затратах материальных ре­сурсов и сил исследователя. Это особенно удобно при выполнении широкомасштабного скринин­га новых штаммов фагов, когда необходимо осу­ществить одновременное тестирование значи­тельного числа объектов на большом количестве бактериальных штаммов. Применение этого ме­тода в санитарной микробиологии позволяет из­бежать работы с хлороформом.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. А.с. 1576558 СССР. Устройство для выделения кампилобактеров из пробы/ Бойцов А.Г., Порин А.А. Опубл. 07.07.90.- Бюл. № 25.

2. МУ № 2285-81. Методические указания по са-нитарно-микробиологическому анализу воды повер­хностных водоемов. - М.: МЗ СССР, 1981.- 36 с.

3. СанПиН 2.1.4.559-96 Питьевая вода. Гигие­нические требования к качеству воды централизо­ванных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества: Санитарные правила и нормы.- М.:Госком-санэпиднадзор России, 1996.- 111 с.

4. Сбойчаков В.Б., Сиволодский Е.П., Акользин В.В. и др. Основы техники бактериологических и иммуномикробиологических исследований //Меди­цинские лабораторные технологии и диагностика: Справочник.- СПб:Интермедика, 1999.- С. 321-421.

5

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52