Количество апоптотических НСК в СОЯ и ПВЯ. (Здесь и на рис. 2-4): М - молодые мыши, С - старые

мыши, * - достоверность отличий по отношению к контролю, • - достоверность отличий между молодыми и старыми контрольными животными.

цветной цифровой камеры DIC-E (WPI), разрешение 652x494 пикселей, и программы Matrox Inspector

Иммуногистохимия. определяли содержание Bax, C-raf-1 и вазопрессина (ВП) в НСК изучаемых центров иммуногистохимически с помощью биотин-стрепта-видин-пероксидазного метода. использовали anti-Bax rabbit polyclonal antibody (1:500; BD Biosciences, USA), anti-C-raf-1 mouse monoclonal antibody (1:400; антитела были любезно предоставлены Dr. Papp U.R., Universitat Wurzburg, Deutschland), и anti-vasopres-sin rabbit polyclonal antibody (1:1000; Sigma Aldrich, USA). изображения срезов были получены с помощью микроскопа PFM (WPI) и цветной видеокамеры DIC-E (WPI). Были проанализированы срезы, содержащие СоЯ и ПВЯ, в НСК которых определяли оптическую плотность Bax, с-RaM- и ВП-иммунореактивного (ир) вещества - на 5-6 гипоталамических срезах для каж­дого животного, отдельно в каждом ядре (Video Test Software). На основании этого высчитывали среднюю оптическую плотность изучаемых белков в нейросек-реторном центре (НСЦ) для группы мышей.

Количественное хемилюминесцентное иммунное определение в крови 17$-эстрадиола. образцы крови изучаемых животных, собранной после декапитации, были центрифугированы, и полученная плазма хра­нилась при -20 °C. Уровень 17р-эстрадиола в плазме крови был определен с помощью анализатора Elecsys 2010 и кита (Roche Diagnostics, USA).

Все полученные данные были обработаны с ис­пользованием критерия Стьюдента (p<0,05) с помо­щью программы Microsoft Excel 5.0a.

Обсуждение результатов

Уровень апоптоза НСК мышей HER2/neu. Мы показали, что нет различий в уровне апоптоза в обоих НСЦ у молодых мышей SHR и HER2/neu (рис. 1). Однако при старении процент гибели клеток значитель­но повышается у мышей SHR в СОЯ и ПВЯ, тогда как у трансгенных животных изменений не происходит. Можно предположить, что регуляция апоптоза у транс­генных мышей протекает по иным сигнальным путям, и защита от апоптоза при старении оказывается у них более надежной, чем у мышей SHR [1].

Экспрессия проапоптотического белка Bax в НСЦ мышей HER2/neu. Синтез белка Bax, проапоп­тотического члена семейства Bcl-2, значительно повы­шается при старении в СОЯ у мышей SHR, но в ПВЯ этого не происходит. Экспрессия Вах в СОЯ мышей HER2/neu обеих возрастных групп сравнима с таковой в СОЯ молодых мышей SHR. В то же время уровень Вах в клетках ПВЯ мышей HER2/neu значительно ниже по сравнению с синтезом Вах в ПВЯ мышей SHR и в СОЯ мышей HER2/neu (рис. 2).

Таким образом, экспрессия Вах в обоих НСЦ мы­шей HER2/neu остается стабильной на поздних этапах онтогенеза.

Экспрессия с-Raf-! в гипоталамусе мышей HER2/neu. C-Raf-1 относится к онкогенным белкам, это серин-треониновая киназа. Продукт гена с-raf-!,

32

УСПЕХи геронтологии • 2007 • Т. 20, № 4

Рис. 2. Содержание Вах-иммунореактивного материала

в НСК СОЯ и ПВЯ.

Рис. 3. Содержание c-Raf-1-иммунореактивного матери­ала в НСК СОЯ и ПВЯ.

Рис. 4. Содержание вазопрессин-иммунореактивного материала в НСК СОЯ и ПВЯ.

Рис. 5. Уровень 17^-эстрадиола в плазме крови у мышей SHR и HER-2/neu разного возраста.

74 kD белок, экспрессируется во всех тканях организ­ма [21]. Наше исследование показало, что экспрессия c-Raf-1 в клетках СОЯ трансгенных и SHR мышей обеих возрастных групп примерно одинакова, так же как в клетках ПВЯ молодых мышей SHR. Но у мышей HER2/neu в НСК ПВЯ содержание c-Raf-1-ИР ма­териала значительно ниже в обеих возрастных группах по сравнению с мышами SHR (рис. 3).

Содержание вазопрессина (ВП) в НСК трансгенных животных. Основным продуктом син­теза НСК СОЯ и ПВЯ является ВП. Показано, что у трансгенных мышей синтез ВП выше, чем у мышей SHR, как в СОЯ, так и в ПВЯ. В клетках ПВЯ оп­тическая плотность ВП-ИР материала была ниже по сравнению с таковой в НСК СОЯ у мышей обеих гене­тических линий. Не обнаружено возрастных различий в синтезе ВП в изучаемых НСЦ в обеих группах живот­ных (рис. 4).

Уровень !7в-эстрадиола в плазме крови трансгенных мышей. Не выявлено значимых разли­чий в концентрации 17|3-эстрадиола в плазме крови мо­лодых мышей HER2 и SHR (рис. 5). Однако при ста­рении у животных дикого типа наблюдается тенденция к снижению уровня эстрадиола в крови, а у трансгенных мышей, напротив, к повышению данного показателя.

Результаты нашего исследования, а также ра­нее полученные данные [1] позволяют заключить, что сверхэкспрессия HER2/neu вызывает значительные изменения синтеза белков, участвующих в регуляции апоптоза, и таким путем блокирует возраст-зависимую активацию клеточной гибели. Это приводит к повышен­ному выживанию клеток НСЦ у трансгенных мышей при старении.

Известно, что Bax является ключевым фактором функционального равновесия между выживанием клет­ки и апоптозом [23]

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35